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清顺

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杀灭分枝杆菌试验

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主营:
除垢剂/杀菌灭藻剂/预膜剂/缓蚀阻垢剂/粘泥剥离剂/密闭式缓蚀剂/聚丙烯酰胺/聚合氯化铝等

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1 目的 

在实验室内测定消毒剂杀灭悬液中或载体上分枝杆菌所需剂量,以验证对分枝杆菌(包括结核杆菌)实用消毒剂量。

2 试验器材

(1) 试验菌株 龟分枝杆菌脓肿亚种ATCC 93326

(2) 培养基 分枝杆菌干燥培养基(上海奥普生物医药有限公司)

(3) 试验菌及其菌悬液或菌片的制备。

(4) 中和剂 (根据 2.1.1.5 所示方法鉴定合格者)

(5) 稀释液 0.1% 胰蛋白胨的生理盐水溶液。

(6) 消毒剂稀释用硬水:见附录A

(7) 有机干扰物质:见附录A

(8) 刻度吸管 (0.1ml1.0ml5.0ml)

(9) 恒温水浴箱。

(10) 喷雾装置(用于喷雾消毒试验)。

(11) 电力混合器。

(12) 计时装置。                                                                          

(13) 恒温培养箱。

3 龟分枝杆菌脓肿亚种 ATCC 93326 菌悬液的制备

1)取冻干菌种管,以无菌操作打开,用毛细吸管吸加适量营养肉汤于管中,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散。取含 5.0 ml10.0mlMADC肉汤或罗氏肉汤试管,滴入少许菌种悬液,置 37培养 18h24h。用接种环取第 1 代培养的菌悬液,划线接种于分枝杆菌培养基平板上,于 37 培养 72h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落,接种于分枝杆菌培养基斜面,于 37 培养 72h,即为第3代培养物。密封后,在4保存,时间不得超过6周。

2)试验时取第3代斜面培养物,在分枝杆菌琼脂斜面上连续传代,培养方法与第3代相同。取第5代~6代的分枝杆菌培养基斜面新鲜培养物(72h),用 5.0ml 吸管吸取 3.0 ml5.0ml 稀释液加入斜面试管内,反复吹吸,洗下菌苔。随后,用 5.0ml 吸管将洗液移至一含有6-7g玻璃珠的无菌圆锥底试管中,在电动混合器混合至少5min。然后将菌液吸入到另一试管内制成菌悬液。

3)将制成的菌悬液,进行活菌培养计数(见 2.1.1.3),按其结果用稀释液稀释至所需浓度。

4)菌悬液保存在4 冰箱内备用。当天使用不得过夜。

4 试验分组

    试验分为下列各组:

    (1) 试验组,按 2.1.1.7.3 规定,选定消毒剂浓度与作用时间。

    (2) 阳性对照组, 以硬水代替消毒剂溶液,按 2.1.1.7.3 规定程序进行试验。所得结果代表试验体系中所含受试菌的初始浓度,并以其计算消毒因子对受试菌的杀灭对数值。

    (3) 阴性对照组,观察同次试验用相关溶液和培养基有无污染。

5 试验程序

常用杀灭试验有: 悬液定量杀灭试验、载体浸泡定量杀灭试验、载体喷雾定量杀菌试验等。其操作程序详见 2.1.1.7.42.1.1.7.52.1.1.7.6。接种后的平皿应放入干净的塑料袋内,在37中培养1周,观察最终结果。

6 评价规定

(1) 产品监督检验,按产品使用说明书指定的使用浓度和作用时间,重复试验3次,要求悬液定量杀灭试验各次试验的杀灭对数值均 4.00 ,要求载体定量杀灭试验,各次试验的杀灭对数值均3.00可判定该产品对分枝杆菌污染物消毒合格。

(2)产品鉴定检验,按产品使用说明书指定的使用浓度和 3 个作用时间,重复试验 3 次,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间,以及最短作用时间的1.5倍时,各次试验的杀灭对数值均应4.00,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间的0.5倍时,允许杀灭对数值<4.00,可判为实验室试验该产品对分枝杆菌污染物消毒的有效剂量。

用载体浸泡定量杀灭试验评价杀菌效果时,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间,以及最短作用时间的1.5倍时,各次试验的杀灭对数值3.00,在产品使用说明书规定的使用浓度与最短作用时间的0.5倍时,允许杀灭对数值<3.00,可判为试验室试验该产品对分枝杆菌污染物消毒的有效剂量。

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