产品中心
    • 客服电话

    • 13760608261
    • 13668901776
    • 服务时间

    • 周一至周日 9:00-21:00
    • 微信二维码

清顺

®

活菌培养计数技术

首页    杀菌灭藻    活菌培养计数技术

主营:
除垢剂/杀菌灭藻剂/预膜剂/缓蚀阻垢剂/粘泥剥离剂/密闭式缓蚀剂/聚丙烯酰胺/聚合氯化铝等

>更多尽在:广州市清顺环保科技有限公司电询:13760608261 & 13668901776<

 

1.适用范围

测定细菌悬液、菌片、采样液等样本中含有活菌的数量。

2.试验器材

1)刻度吸管(1.0ml5.0ml)。

2稀释液:见附录A

3)营养琼脂培养基:见附录A

4)电动混合器

3.操作程序

本规范要求在杀菌试验中的活菌培养计数统一使用倾注法。其操作程序如下。

1)对菌悬液可直接进行培养计数。对菌片、采样棉拭与小型固体样本等,应将其上的细菌洗下成为菌悬液后进行培养计数。洗菌时,一般以稀释液为洗液。具体方法如下: 取含 5.0ml 稀释液无菌试管,对菌片或小型固体样本直接投入即可,对棉拭则将其采样端剪入管内,每管一份样本。而后,用电动混合器混合20s(或在手掌上用力振敲 80 次),将菌洗下形成菌悬液。以上操作应严格按无菌要求进行。

2)将试管按需要数量分组排列于试管架上, 每管加入 4.5ml 稀释液。各组由左向右,逐管标上 10-110-210-3......等。

3)将菌悬液样本在用电动混合器混合20s(或在手掌上用力振敲 80次),随即吸取 0.5ml加至 10-1 管内。

4)将 10-1 管依前法用电动混合器混合20s(或在手掌上用力振敲 80次),混匀,再吸取出0.5ml加入10-2 管内。如此类推,直至最后一管。必要时,还可作某稀释度的1:11:4稀释。

5)选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为 15cfu300cfu 者为宜),吸取其中混合均匀的悬液 1.0ml 加于无菌平皿内。每一稀释度接种 3个平皿。一般需接种2个~3个不同稀释度。平皿加样前,应先按组编号,以免弄混。

6将冷4045的熔化营养琼脂培养基,倾注于已加入样液的平皿中,每平皿15ml20ml

7)将平皿盖好,即刻轻轻摇动混匀,平放于台上。待琼脂凝固后,翻转平皿,使底向上,置37温箱内培养。

8)每日观察细菌生长情况。培养至规定时间(细菌繁殖体为 48h,白色念珠菌与细菌芽孢为 72h),计数最终结果的菌落数。

9)对菌片和采样棉拭洗液的活菌培养计数,先按各试验要求处理(如去除残留消毒剂等),而后取其最终样液按上法进行培养计数。

10)计数菌落时,一般以肉眼观察,必要时用放大镜检查。以菌落数在15cfu300cfu的平板为准,每个稀释度 3 个平板生长菌落数全合乎上述标准,则以该3个平板的菌落平均值作为结果;若有2个符合上述标准,则以该合格的两个平板菌落的平均值为结果。但对黑曲霉菌活菌计数及杀灭试验时,平板菌落数应在15cfu100cfu之间。

对估计菌量极少的样本(如消毒处理后样本),在培养计数时可不作稀释,即使平板菌落数未达15时,亦可用其计算最终结果。

将求得的平均菌落值,再乘以稀释倍数,即得每毫升原样液中的菌量。菌量单位为cfu

4.活菌计数中技术操作误差的测定

试验者在活菌计数中因技术操作而引起的菌落数误差率(平板间、稀释度间)不宜超过10%。对误差率的自检,可按以下公式计算。

1)平板间误差率计算公式:

平板间误差率计算公式

2)稀释度间误差率计算公式:

 

稀释度间误差率计算公式:

5. 注意事项

1)严格无菌操作,防止污染。

2)认真检查试验器材有无破损(要特别注意试管底的裂痕和破洞),以防丢失样本和污染环境。

3)注意菌液的均匀分散。

4)稀释或取液时要准确,尽量减少吸管使用中产生的误差。

5)每吸取一个稀释度样液,必须更换一支吸管,以减少误差。

6)样液接种于平皿后应尽快倾注营养琼脂培养基,避免样液干燥于平皿上,影响结果的准确性。

7)倾注时琼脂培养基温度不得超过45,以防损伤细菌或真菌。倾注和摇动时,动作应尽量平稳,以利细菌分散均匀,便于计数菌落。勿使培养基外溢,以免影响结果的准确性和造成环境的污染。

8)为提高试验成功率,最好先用浊度计对原菌液含菌量做出估计,尽可能在首次试验时所取的有限稀释范围内(2个~3 稀释度)即有长菌在 15cfu300cfu 间的平板。

9)结果计算时,必须弄清稀释倍数,以免计算错误。

浏览量:0
收藏